ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ. Кафедра гистологии, эмбриологии и цитологии лечебного факультета
1- основание; 2- тубусодержатель; 3- тубус; 4- окуляр; 5- револьвер; 6- объективы; 7- столик; 8- конденсор с ирисовой диафрагмой; 9- винт конденсора; 10- зеркало; 11- микрометрический винт; 12- макрометрический винт. CВЕТОВОЙ МОНОКУЛЯРНЫЙ МИКРОСКОП С ЗЕРКАЛОМ
окуляры объективы револьверное устройство конденсор ирисовая диафрагма рукоятка перемещения препарата источник света предметный столик регулятор яркости источника света выключатель штатив основание микровинт препаратодержатель макровинт БИНОКУЛЯРНЫЙ МИКРОСКОП СО ВСТРОЕННЫМ ИСТОЧНИКОМ ОСВЕЩЕНИЯ
Гистологический препарат устанавливается на предметном столике покровным стеклом вверх. Структурные элементы среза ориентируются с учетом того, что формируется перевернутое изображение изучаемого объекта. Первоначально изучение проводится на малом увеличении. Четкость изображения настраивается с помощью макровинта. Тубус микроскопа опускают, следя за тем, чтобы не раздавить препарат ( ~ 1 см от препарата). Переход на большое увеличение осуществляется вращением револьвера ( не трогая макровинт! ). При большом увеличении микроскопа четкость изображения устанавливается только с помощью микровинта. После завершения изучения гистологического препарата вращением револьвера устанавливается малое увеличение и препарат снимается с предметного столика (манипуляции с макро- и микровинтом не требуются) ОСНОВНЫЕ ЭТАПЫ РАБОТЫ С МИКРОСКОПОМ :
ПРОХОЖДЕНИЕ СВЕТОВОГО ПУЧКА ПРИ СВЕТОВОЙ МИКРОСКОПИИ
Световая Электронная трансмиссионная ВИДЫ МИКРОСКОПИИ Электронная сканирующая Конфокальная
- мазо к (если ткань имеет жидкую консистенцию, например, кровь, костный мозг, слюна, спинномозговая жидкость и др.), - отпечаток (для ломких паренхиматозных органов проводят разлом органа, затем к месту разлома прикладывают предметное стекло, на которое приклеиваются свободные клетки, например, селезенки, тимуса, печени), - пленочный препарат из ткани (путем растягивания или раздавливания между двумя стеклами, например, соединительной ткани или брюшины, плевры, мягкой мозговой оболочки), - тотальный препарат ( половые клетки, зародыши ранних стадий развития), - тонкий срез ткани или органа (используется чаще всего, может долго храниться и многократно использоваться для изучения тканей, клеток и субклеточных структур. - электронной микроскопии исследуют ультраструктуру клеток и других элементов ткани вплоть до атомно-молекулярного уровня ). ВИДЫ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ
ВИДЫ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ Срез Мазок Пленочный препарат Тотальный препарат
ЭТАПЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО СРЕЗА
- Основные красители – обычно красящие соли оснований (гематоксилин, метиловый синий, толуидиновый синий, азуры и др.), связываясь с кислотными группами внутри клеток и в межклеточном веществе, вызывают их окрашивание. Структуры, воспринимающие основные красители, называются базофильными. - Кислые красители – кислоты и их соли (эозин, пирофуксин, эритрозин), связываясь с осн о вными соединениями внутри и вне клетки, вызывают их окрашивание в цвета красителя. Структуры, воспринимающие кислые красители, носят название оксифильные (ацидофильные, эозинофильные). Нейтральные красители содержат как основные, так и кислые красящие компоненты. Кроме этих трех красителей используется ряд специальных методов окраски ВИДЫ ОКРАСКИ
НАИБОЛЕЕ ЧАСТО ИСПОЛЬЗУЕМАЯ ОКРАСКА Гематоксилин - Эозин
ИМПРЕГНАЦИЯ СОЛЯМИ СЕРЕБРА – используется для выявления аргирофильных структур в нервной ткани
ОКРАСКА ОРСЕИНОМ – позволяет выявлять эластические волокна
ОКРАСКА ОСМИЕВОЙ КИСЛОТОЙ (с докраской кармином) – позволяет выявлять липидные включения
УВЕЛИЧЕНИЕ ( световая микроскопия) х40 х200 х70 х1000
х45000 х56000 х5000 х2500 УВЕЛИЧЕНИЕ (электронная микроскопия)
Препарат №1 «Нервные клетки и клетки глии спинномозгового чувствительного узла» Окраска гематоксилин-эозин
Цитоплазма Ядро Ядрышко Нейрон Ядра глиальных клеток
Препарат №2 «Симпласт – поперечно-полосатое мышечное волокно. Срез скелетной мышцы» Окраска гематоксилин-эозин
х6000 х25000
Препарат №3 «Эластическая хрящевая ткань. Срез ушной раковины» Окраска орсеином
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ
