Приготовила: студентка гр. БИО-171 Петухова Е.О. Проверила: проф., д.т.н. Артюхова С.И.
Питательная среда – специальный однокомпонентный или много-компонентный субстрат, необхо-димый для культивирования различных микроорганизмов. Питательные среды необходимы для получения чистых культур микроорганизмов, изучения особен-ностей их морфологии и физиологии, а также для сохранения микроорганизмов в виде чистых культур в лабора-торных и производственных условиях.
быть питательными, т.е. содержать в легко усваиваемом виде вещества, необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей; иметь оптимальную концентрацию pH ; стерильность быть изотоничными, т.е. осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки; унифицированность, т.е. должны содержать постоянное количество отдельных ингредиентов; Прозрачность, чтобы было удобнее следить за ростом культур
Потребность в питательных веществах и свойствах среды у разных видов микроорганизмов неодинакова. Это исключает возможность создания универсальной среды. Кроме того, на выбор той или иной среды влияют цели исследования (выделение, выращивание, длительное сохранение микроорганизмов в культурах).
Среды бывают: жидкие плотные полужидкие. Плотные и полужидкие среды готовят из жидких веществ, к которым для получения среды нужной консистенции прибавляют обычно агар-агар или желатин.
По исходным компонентам различают натуральные, полусинтетические, синтетические среды. Чаще всего обычно используют полусинтетические среды, в которых ценные пищевые продукты (мясо и др.) заменены непищевыми: костной и рыбной мукой, кормовыми дрожжами, сгустками крови и др. Эти среды хороши для выращивания определенных групп микроорганизмов, а также для выделения из среды продуктов их жизнедеятельности: антибиотиков, витаминов.
Натуральные среды готовят из продуктов животного и растительного происхо-ждения (мяса, рыбы, молока, овощей, фруктов и др.), поэтому точный состав этих сред неизвестен. Их используют в том случае, когда хотят вырастить различные виды микроор-ганизмов.
Синтетические среды готовят из определенных химически чистых органических и неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворенных в бидистил-лированной воде. Важное преимущество этих сред в том, что состав их постоянен (известно, сколько и какие вещества в них входят), поэтому эти среды легко воспроизводимы.
Среды делят на простые и сложные. К первым относят мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), бульон и агар Хоттингера, питательный желатин и пептонную воду. Сложные среды готовят, прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества, необходимые для размножения того или иного микроорганизма. мясопептонный агар Кровяной агар
Основные среды служат для культивирования большинства патогенных микробов. Примеры: МПА, МПБ, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода; специальные среды служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах. Примеры: кровяной, сывороточный и желчный агары ; Пептонная вода Сывороточный агар
элективные (избирательные) среды служат для выделения определенного вида микробов, росту которых они благо-приятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. Примеры: среды Мюллера, Вильсона-Блера, Плоскирева и щелочной агар ; дифференциально-диагности-ческие среды позволяют отличить один вид микробов от другого по ферментативной активности. При росте микроорганизмов, расщепляю-щих углеводы, изменяется цвет среды. Примеры: среды Гисса, Эндо и Левина. Среда Мюллера Среда Эндо
консервирующие среды предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала; в них предотвращается отмирание микроорга-низмов и подавляется развитие других микроорганизмов. Примеры: глицериновая смесь, боратная смесь, фосфатно-буферная смесь, тиогликолевая среда для анаэробов. Тиогликолевая среда
Посуда. Посуда для приготовления сред не должна содержать посторонних веществ, например щелочей, выделяемых некоторыми сортами стекла, или окислов железа, которые могут попасть в среду при варке её в ржавых кастрюлях. Лучше пользоваться стеклянной, эмалированной или алюминиевой посудой. Перед употреблением посуду необходимо тщательно вымыть, прополоскать и высушить. Сырьё. Исходным сырьём для приготовления большинства сред служат продукты животного и растительного происхождения, а также готовые полуфабрикаты.
Взвешивание: отбирают навески компо-нентов питательной среды на аналитических весах; Растворение: компоненты питательной среды растворяют в предварительно нагретой до 70 °С дистиллированной воде. Растворы макро- и микросолей готовят отдельно. Растворы фосфатов входящих в состав макросолей также готовят отдельно, т. к. в процессе стерилизации в автоклаве они выпадают в осадок и в дальнейшем вновь требуют растворения; Кипячение: растворы питательных сред кипятят на водяной бане в течении 2 мин.
Установление pH : ориентировочно производят с помощью индикаторной бумаги, для точного определения пользуются потенциометром. При стерилизации pH снижается на 0,2, поэтому сначала готовят более щелочной раствор. Фильтрация жидких и расплавленных плотных сред производят через влажный бумажный или матерчатый фильтры. Фильтрация агаровых сред затруднена – они быстро застывают. Обычно их фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Розлив сред: питательные среды разливают не более чем на 3/4 емкости, так как при стерилизации могут намокнуть пробки и среды утратят стерильность.
Стерилизация: для стерилизации питательный сред используют термический способ: стерилизация насыщенным паром под давлением ( автоклавирование ), дробная стерилизация (тиндализация), кипячение. Режим стерилизации зависит от состава среды и указан в её рецепте. При автоклавировании 3–5 % жидкости теряется в результате испарения, поэтому рекомендуется в приготавливаемые среды добавлять сверх объема примерно 5 % дистиллированной воды. Тогда после стерилизации среда будет иметь требуемую концентрацию. Этапы приготовления
Контроль: для контроля стерильности среды ставят на 2 суток в термостат, после чего их просматривают. химический контроль окончательно устанавливает pH, содержание общего и амминого азота, пептона, хлоридов. для биологического контроля несколько образцов среды засевают специально подобранными культурами, и по их росту судят о питательных свойствах среды. Этапы приготовления
