Стафилококки и стрептококки
17 группа по Берджи – грам-положительные кокки семейство Microсоссасеае род Staphylococcus виды : S. a ureus S. epidermidis S. saprophyticus
от лат. Staphyl os ( виноградная гроздь ) + c o cc os ( шар ) Грамположительные Образуют микрокапсулу (только в организме человека) Неподвижны Спор не образуют
неприхотливы, могут расти на простых средах устойчивы к повышенному содержанию хлорида натрия и хорошо растут на средах с содержанием 5 - 15% NaCl среды : солевой, сахарный бульон молочно-солевой агар (МСА) желточно-солевой агар (ЖСА) (Чистовича) кровяной агар образуют непрозрачные, круглые, ровные колонии белого, жёлтого или золотистого цвета ( образуют липохромные пигменты ) на жидких средах – диффузный рост
каталазоположительны (отличие от стрептококков) по наличию плазмокоагулазы все стафилококки разделяют на две группы : 1. коагулазо-положительные : S. аureus 2. коагулазо-отрицательные : S. epidermidis и S. saprophyticus ферментируют многие углеводы с образованием кислоты S. aureus расщепляет маннит в анаэробных условиях восстанавливают нитраты в нитриты образуют H 2 S разлагают мочевину образуют лецитиназу
S. aureus гнойно-воспалительные заболевания кожи и подкожной жировой клетчатки раневые инфекции эндокардит пневмония артриты остеомиелиты перитонит глазные инфекции инфекции мочевыводящей системы сепсис синдром «ошпаренной кожи», пузырчатка новорождённых синдром токсического шока пищевые токсикоинфекции
Эпидемиология Источник инфекции – человек (больной, носитель, может быть аутоинфекция) Пути передачи : воздушно-капельный, воздушно-пылевой контактный алиментарный Восприимчивый коллектив – любой человек
Факторы патогенности стафилококков факторы адгезии и колонизации : микрокапсула тейхоевые кислоты белок А ферменты патогенности : гиалуронидаза (обусловливает высокую инвазивность ) плазмокоагулаза (переводит протромбин в тромбин, который вызывает свертывание фибриногена, в результате чего каждая клетка покрывается белковой пленкой, защищающей от фагоцитов) фибринолизин лецитиназа ( лецитовителлаза ) ДНКаза и др. агрессины : микрокапсула тейхоевые кислоты белок А : связывается с Fc-участком антител, а значит молекулы IgG связываются с поверхностью бактериальных клеток в неправильной ориентации. Это приводит к нарушению опсонизации и фагоцитоза. токсины : экзотоксины
Мембранотоксины ( порообразующие ) : -токсин действует на эритроциты, эндотелиоциты, полиморфноядерные лейкоциты, фибробласты, гепатоциты. При введении лабораторным животным вызывает кожные некротические реакции, после внутривенного введения - животное погибает через 3 – 5 минут ; -токсин ( сфингомиелиназа ) проявляет выраженные свойства холодового гемолизина (его активность максимальна при низкой температуре) ; -токсин двухкомпонентный гемолизин с умеренной активностью в отношении эритроцитов человека ; δ -токсин гемолизин
Токсин синдрома токсического шока (TSST-1) – действует за счёт стимулирования выделения ФНО α. Обладает вазотропным и нейротропным действием. Лейкоцидин - избирательно разрушает лейкоциты (нейтрофилы) Энтеротоксины А, В, С, D, Е - термостабильные низкомолекулярные белки, ответственны за развитие пищевых отравлений ; механизм действия до конца не изучен. Эксфолиатины А и В - вызывают разрушение десмосом зернистого слоя эпидермиса и отслойку рогового слоя эпидермиса
Фолликулит Фурункул
Исследуемый материал – определяется очагом поражения (гной, кровь, мокрота, смыв со слизистых, моча, фекалии и т. д.). Методы диагностики : Микроскопический метод ориентировочный. Наибольшую диагностическую ценность имеет при микроскопии материала из изначально стерильных полостей. Видны граположительные кокки скоплениями в виде виноградных гроздей.
Бактериологический метод – основной Материал засевают на : молочно-солевой агар (МСА) МПА 6,5% натрия хлорида 10% обезжиренного стерильного молока При росте на МСА оценивают пигментообразование желточно-солевой агар (ЖСА) ( Чистовича ) МПА 10% натрия хлорида 15 - 20% желточной эмульсии (яичный желток взбивают в 150 - 200 мл стерильного физ. раствора). При росте на ЖСА оценивают наличие радужного венчика вокруг колоний за счет фермента лецитовителлазы кровяной агар (КА) При росте на кровяном агаре оценивают зону прозрачного гемолиза вокруг колоний
Идентификация чистой культуры : 1) установление принадлежности выделенной культуры к семейству Micrococcaceae и роду Staphylococcus - тест на каталазу. Каталаза – это фермент, который расщепляет перекись водорода на воду и кислород: 2H 2 O 2 = 2H 2 O + O 2. При этом при добавлении H 2 O 2 образуются пузырьки кислорода, что указывает на наличие каталазной активности.
2)Установление принадлежности чистой культуры к S. aureus требует постановки 2 тестов : тест на плазмокоагулазу культуру стафилококка вносят в пробирку с 0,5 мл плазмы крови кролика, помещают в термостат при 37⁰С, через 3 часа пробирку вынимают, оставляют при комнатной температуре на 18 - 20 часов. Реакция считается положительной независимо от степени свертывания плазмы - от небольшого сгустка, взвешенного в плазме, до полного неподвижного сгустка. - ферментация маннита в анаэробных условиях используют полужидкую среду Гисса с индикатором ВР, содержащую маннит. После посева заливают вазелиновым маслом. В случае разложения маннита среда приобретает синий цвет по всему столбику агара.
Коагулазный тест Staphylococcus aureus Коагулазный тест Staphylococcus epidermidis
Испытуемую культуру стафилококка засевают на МПА, затем делят чашку на 22 квадрата (22 типовых фага). В каждый квадрат наносят по одной капле различных типовых фагов. После суточной инкубации в термостате отмечают квадраты, в которых отмечается лизис бактерий. Фаготип бактериальной культуры определяется типом лизирующего ее фага.
содержит : стафилококковый анатоксин, анатоксин синегнойной палочки, цитоплазматический АГ стафилококка, протейный АГ, адсорбированные на гидроокиси алюминия. Используется для профилактики.
получают на станциях переливания крови от доноров, иммунизированных стафилококковым анатоксином. После проведенной иммунизации и появления в крови специфических антител в титре 6,0 — 10 МЕ/л донорам проводится плазмаферез. В ходе плазмафереза из организма извлекается порция крови, которая затем, в зависимости от метода, разделяется на плазму и форменные элементы, клетки крови возвращаются в организм, а удалённая плазма используется.
Пиобактериофаг Бактериофаг стафилококковый Интестибактериофаг
Стрептококки
17 группа по Берджи - грамположительные кокки Семейство: Streptococcaceae Роды (всего 6) : St repto coccus Виды : пиогенные : S. pyogenes, S. agalactiae ротовой полости: S. mutans, S. pneumoniae анаэробные другие стрептококки Enterococcus Виды : Enterococcus faecalis Enterococcus faecium и др.
основана на наличии группоспецифичных С-полисахаридов в клеточной стенке серогруппы (20: с А - по V ) Группа А - S. pyogenes Группа В - S. agalactiae Группа D – Enterococcus faecalis серовары выделяют по специфичности белковых АГ (М, Т, R )
α- гемолитические дают частичный ( зеленящий ) гемолиз (образуется метгемоглобин) β- гемолитические дают полный (прозрачный) гемолиз γ- гемолитические не вызывают гемолиз а на питательной среде
от лат. S treptos ( цепочка ) + c o ccu s ( шар ) Грамположительные Неподвижны Спор не образуют Пневмококк и – ланцетовидные или овальные клетки, лежат парами, образуют капсулу
Питательные потребности сложные. Обычно растут на средах с добавлением крови, сыворотки, асцитической жидкости, углеводов. Предпочитают сред ы с добавлением крови На плотных питательных средах - мелкие серые колонии, окруженные зоной гемолиза На жидких средах - придонный, пристеночный, диффузный рост (в зависимости от вида)
С-п олисахаридны й антиген - группоспецифический ( серогрупп ы) Б елков ые М-антиген ы, Т и R – типоспецифический ( серо вары) Капсульные полисахаридные антигены – типоспецифические для пневмококка (серовары)
Фарингит Раневые инфекции, поражения кожи и мягких тканей Эндокардит Менингит Артрит Пневмония Сепсис и др. Специфические : Ангина Гломерулонефрит Скарлатина Ревматизм Рожистое воспаление (рожа)
Источник инфекци и - больной человек или бактерионоситель Основные пути передачи : воздушно-капельный контактный алиментарный
Факторы патогенности стрептококков Факторы адгезии и колонизации : капсула тейхоевые кислоты белок М Ферменты патогенности : гиалуронидаза (обусловливает высокую инвазивность ) фибринолизин ( стрептокиназа ) (превращает плазминоген в плазмин, который гидролизует фибрин) ДНКаза ( стрептодорназа ) и др. Агрессины : капсула белок М фактор, угнетающий хемотаксис (С5а-пептидаза) Токсины : экзотоксины
Стрептолизин О – гемолитическое, лейкотоксическое, кардиотоксическое действие ; сильный АГ Стрептолизин S – гемолитическое, лейкотоксическое действие ; слабый АГ Лейкоцидин - избирательно разрушает лейкоциты (нейтрофилы) Эритрогенны й (пирогенны й ) токсин – эритрогенное, пирогенное (стимулирует синтез макрофагами ИЛ-1 и ФНО), аллергенное, иммуносупрессорное действие Кардиогепатический токсин
Исследуемый материал – определяется очагом поражения (гной, кровь, мокрота, налёт с миндалин, слизь из зева, отделяемое ран, моча, ликвор и т. д.). Методы диагностики : Экспресс-метод : ИФА реакция латекс-агглютинации реакция коагглютинации 2) Микроскопический метод ориентировочный
3)Бактериологический метод – основной Материал засевают на : кровяной агар (КА) : через 24 час оценивают зону гемолиза вокруг колоний
Для дифференцировки стрептококков группы А от прочих β -гемолитичеких стрептококков применяют тест чувствительности к бацитрацину методом дисков Для дифференцировки S.pyogenes ставят тест гидролиза пирролидонил- β -нафтиламида ( ПИР-тест ) : в пробирки вносят полоски фильтровальной бумаги, пропитанные ПИР. Под действием бактериальных пептидаз ПИР расщепляется до β -нафтиламида и после внесения р-ра 4-диметиламиноцинамальдегида полоски окрашиваются в вишнево-красный цвет.
Для идентификации S. agalactiae используют тест гидролиза гиппурата. Принцип. Стрептококки группы В ( Streptococcus agalactiae ) могут гидролизовать гиппурат натрия с образованием глицина и бензоата натрия. Освобождённый глицин определяется цветной реакцией с раствором нингидрина. Для постановки теста используют взвесь из суточной культуры стрептококка, в которую погружают 1 полоску так, чтобы вся индикаторная зона полоски была погружена в раствор Инкубируют в течение 24 часов и затем добавляют в пробирку 4 капли реактива После 5 - 10 минут инкубации при температуре от +15 до +25 º С учитывают результат в соответствии с таблицей : Таким образом, стрептококки группы В можно отличить от стрептококков групп A, C, F и G, которые не гидролизуют гиппурат. ТЕСТ РЕАКЦИЯ Положительная Отрицательная Гидролиз гиппурата Na Синее, сине-фиолетовое кольцо Бесцветное, светло-синее
Для идентификации S. agalactiae используют САМР-тест Принцип : при выращивании на кровяном агаре S. agalactiae совместно со стафилококком, который продуцирует гемолизин, происходит усиление лизиса эритроцитов и, соответственно, - увеличение образуемых зон гемолиза. В центр чашки Петри с кровяным агаром сплошной линией засевают культуру S. aureus, продуцирующего бета-гемолизин. Перпендикулярными по отношению к линии посева стафилококка штрихами высевают культуры стрептококков. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-15 часов. При “ + ” результате в месте пересечения посевов стрептококка со стафилококком гемолиз приобретает форму бабочки.
Для дифференцировки S.pneumoniae от прочих стрептококков используют тест чувствительности к оптохину методом дисков. От зеленящих стрептококков S.pneumoniae отличает чувствительность к солям желчных кислот ( дезоксихолатная проба ). Тест основан на способности 10% желчи лизировать пневмококк. В две пробирки с сывороточным бульоном с 10% желчи КРС и без нее добавляют испытуемую культуру и выдерживают 1 час при +37°С. При лизисе пневмококка отмечается просветление бульона по сравнению с контролем.
4) Серодиагностика Для диагностики ревматического процесса определяют АТ к стрептолизину О или стрептодорназе.
В акцина «Пневмо – 23» содержит капсульные полисахаридные А Г 23 различных сероваров пневмококка
