Запорожский государственный медицинский университет Кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии ПАТОГЕННЫЕ КОККИ ас. Войтович А. В.
круглые (кокки) идеальный шар – стафилококки овальные – стрептококки ланцетовидные – пневмококк бобовидные – нейссерии
Строение клеточной стенки бактерий
Стафилококки ( Staphylococcus ) Стафилококки впервые открыл Л. Пастер в 1880 году. 1822 - 1895
Стафилококки Таксономическое положение род Staphylococcus > 35 видов Коагулазопозитивные стафилококки : S.aureus, S. intermedius, S.hyicus Коагулазонегативные стафилококки : S.epidermidis, S.saprophyticus, S. hominis, S.capitis
Бактериоскопический Бактериологический ( культуральный ) метод - основной ; Серологические методы ( диагностика при хронических или латентных формах инфекции )
Материал: смыв со слизистой, гной, кровь, мокрота, отделяемое раны и др. 1 этап : микроскопия полученного материала (первичный препарат)
2 этап : Выделение чистой культуры (посев на КА и ЖСА)
3 этап : Изучение культуральных и морфологических свойств; отсев типичных колоний стафилококка на свежий агар
4 этап : Идентификация выделенной чистой культуры. Биохимическая идентификация на системах А pi 20 STAPH
При выделении плазмокоагулазы стафилококками в пробирке образуется сгусток кроличьей плазмы.
При добавлении перекиси водорода видно выделение кислорода Фаготипирование стафилококков Видно зону лизиса культуры стафилококков диагностическими типовыми бактериофагами.
Определение чувствительности к антибиотикам методом бумажных дисков. Вокруг дисков с антибиотиками видны зоны задержки роста бактериальной культуры.
По степени связи с бактерией Класс А – секретируемые во внешнюю среду; Класс В – токсины, частично связанные с микробной клеткой и частично секретируемые в окружающую среду; Класс С – токсины, прочно связанные с бактерией. По механизму действия токсины, повреждающие клеточные мембраны; токсины, ингибирующие синтез белка; токсины, активирующие пути метаболизма, контролируемые вторичными мессенджерами ; протеазы; активаторы иммунного ответа.
Ферменты вирулентности (патогенности): Плазмокоагулаза : переводит протромбин в тромбин из фибриногена вокруг микробной клетки образуется фибриновый чехол защита от фагоцитоза. Гиалуронидаза, коллагеназа, ММР разрушение межклеточного вещества соединительной ткани Фибринолизин ( Staphylokinase ) растворение сгустка фибрина в зоне воспаления распространение микробов вглубь органов и тканей ДНК-аза Лецитиназа и др. Белок А (поверхностный белок, ковалентно связан с ПГ): взаимодействует с Fc -фрагментами IgG, в результате чего нарушается активация системы комплемента и нарушается опсонизация и фагоцитоз митоген для Т- и В-лимфоцитов;
Экзотоксины Мембраноповреждающие ( - токсин, β -, γ -, δ -, лейкоцидин Патона- Валентайна -PVL ). Активаторы иммунного ответа ( эксфолиатины, экзотоксин синдрома токсического шока, энтеротоксины ). Аллергены – вызывают как ГНТ, так и ГЗТ. Перекрестно реагирующие антигены Факторы, угнетающие фагоцитоз (микрокапсула, белок А, экзотоксины)
Panton-Valentine Leukocidin
Главная проблема лечения стафилококковых инфекций – высокая лекарственная устойчивость. Один из механизмов лекарственной устойчивости – продукция β - лактамазы Известны пенициллиназа -резистентные антибиотики, такие как оксациллин, метициллин и др. Устойчивость к метициллину (оксациллину) является маркером на множественную лекарственную устойчивость. МРСА составляют основную проблему внутрибольничных инфекций В отношении МРСА эффективны: гликопептидный антибиотик – ванкомицин, оксазолидоновый антибиотик – линезолид.
Основные представители микробиоты слизистой оболочки носа студентов 2-го курса 2012 – 2014 гг Частота выявляемости S. aureus (КПС) составила почти 30%
КНС КПС до групи MLS 30%
1. Антибиотики ; 2. Стафилококковый бактериофаг ( при локализованных формах ), пиобактериофаг ; 3. Стафилококковый анатоксин ( при лечении хронических форм инфекции ); 4. Гипериммунная стафилококковая плазма, сыворотка ( лечение токсинемии ); 5. Стафилококковая аутовакцина ( лечение хронических форм инфекции ).
Бактерии для подсчета сородичей используют химическую систему связи – так называемый Quorum sensing. Свой кворум бактерии определяют химическим путем, выделяя особые сигнальные вещества – феромоны. Их концентрацию они измеряют с помощью специфических рецепторов.
При малой плотности колонии (слева) токсины (красные кружки) не продуцируютя, при достижении кворума (справа) – синтез. Синие кружки - феромоны Quorum sensing
Стрептококки ( Streptococcus ) Впервые стрептококки открыл Т. Бильрот в 1874 г. при ранових инфекциях, позже Л. Пастер выявил их при сепсисе. СТРЕПТОКОККИ
Таксономическое положение Семейство Streptococcaceae род Streptococcus Стрептококки классифицируют по: характеру роста на кровяном агаре антигенному строению (классификация по Лансфилд ): серогруппа – полисахаридный антиген клеточной стенки серотип – по М-белку α – неполный или «зеленящий» гемолиз; β – полный гемолиз; γ – отсутствие гемолиза.
Бета-гемолитические Streptococcus ( группа по Лансфилд) Группа A Streptococcus ( S. pyogenes ) Группа B Streptococcus ( S. agalactiae ) Группа C Streptococcus Группа G Streptococcus Альфа-гемолитические Streptococcus S. p neumoniae (Pneumococcus) S. v iridans (бактериальный эндокардит) Негемолитические Streptococcus S. faecalis (Группа D) Отдельные варианты групп B, C, D, H, and O
Морфологические овальные грамположительные кокки, располагающиеся в мазке цепочками, спор и макрокапсул не образуют, неподвижны Культуральные растут на сложных средах (содержащих глюкозу, сыворотку или кровь) при 37 0 С, образуют через сутки мелкие S -формы колоний Биохимические = стафилококки, но менее выражена протеолитическая активность Серологические полисахаридные (групповые) антигены – полисахарид КС белковые типоспецифические антигены (чаще всего для серологической идентификации используется М-белок, по нему различают около 100 сероваров) Резистентность во внешней среде – высокая
Факторы адгези и и колонизации : г иалуроновая капсула (защитная функция, антигенная мимикрия), поверхностные белки M,R,T (М белок играет основную роль в фиксации), липотейхоевые и тейхоевые кислоты, нейраминидаза; Факторы инвазии : стрептокиназа (фибринолизин), стрептодорназа ( ДНКаза ), гиалуронидаза, фактор помутнения (вызывает гидролиз липопротеидов, в том числе сыворотки крови Антифагоцитарные факторы: капсула, поверхностные белки, пептидогликан, С-полисахарид, Fc -реактивный белок, С5а пептидаза, фактор, угнетающий хемотаксис; Токсины: Стрептолизин О ( цитотоксин, действует в анаэробных условиях, обладает антигенными свойствами); Стрептолизин S ( цитотоксин, устойчив к кислороду, неиммуногенен ); Кардиогепатический токсин; Эритрогенный токсин (скарлатинозный), серотипы А, В, С
Микробиологическое исследование стрептококковых инфекций
Профилактика и лечение Высокочувствительны к пеницилину и эритромицину. Некоторые виды резистентные к тетрациклинам. СТРЕПТОКОККИ
Грамнегативные кокки входят в семейство нейсерий ( Neisseriaceae ). А. Нейссер первым открыл в 1879 г. один из видов этой группы - возбудителя гонореи. Нейссерии
морфологические: бобовидные грамотрицательные кокки, располагающиеся в мазке попарно, спор и макрокапсул не образуют, неподвижны, L- формы. культуральные : растут на сложных питательных средах при 37 0 С (лучше – при повышенном СО 2 ). Сывороточный агар, Шоколадный агар. биохимические: оксидаза (родовой признак), ферментируют до кислоты глюкозу (видовой признак) серологические: антигенами являются белки наружной мембраны (12 серогрупп ) и ЛПС факторы патогенности: пили (обеспечивают адгезию и колонизацию) ЛПС (эндотоксин) IgA протеаза Поверхностные антигены (у гонококков) резистентность во внешней среде очень низкая
Биохимически малоактивны Растут на обогащенных питательных средах: кровяной агар, шоколадный агар в атмосфере 5-10% углекислого газа Мало устойчивы к внешним воздействиям. Прямые солнечные лучи, температура ниже 22°, высыхание, действие дезинфицирующих средств приводят к его быстрой гибели. N. Meningitidis рост на шоколадном агаре
Адгези вность – фимбрии и белки наружной мембраны Антифагоцитарные факторы – полисахаридная капсула Ферменты инвазии : гиалуронидаза, протеазы (инактивируют sIgA – фактор местного иммунитета), нейраминидаза, фибринолизин Основной токсин – эндотоксин – ЛПС наружноймембраны клеточной стенки (пирогенный, провоспалительный, более высокотоксичен, чем ЛПС энтеробактерий )
Эпидемиология источник инфекции : человек в 70-80% случаев – носители в 10-30% случаев – больные менингококковым назофарингитом в 1-3% случаев – больные генерализованными формами менингококковой инфекции механизм передачи – аэрогенный (воздушно-капельный путь) Клинические проявления бактерионосительство менингококковый назофарингит менингококкцемия эпидемический цереброспинальный менингит
Материал для исследования Клинический материал - ликвор, кровь, слизь из носоглотки. При спинномозговой пункции ликвор вытекает струей и обычно мутный. Пробы хранят не более 2-3 час до исследования Взятие мазка ( nasopharynx)
Иммунофлуоресцентный прямой Бактериоскопический (микроскопия мазка из мутного ликвора, вытекающего под давлением по Граму)
1-этап – посев исследуемого материала на плотные питательные среды для получения изолированных колоний - шоколадный агар, сывороточные среды, асцит агар. Инкубируют при 37 ° С, 24-48 час., в атмосфере содержащей 10% углекислого газа. 2-этап - изучение выросших колоний (макроскопическое и микроскопическое) и пересев на скошенный сывороточный агар для получения чистой культуры После суточной инкубации образуются голубоватые колонии с ровными краями и гладкой поверхностью 3-этап - идентификация возбудителя Биохимическое типирование Менингококки ферментируют только мальтозу, глюкозу Тест на чувствительность к антибиотикам
Антибиотикотерапия Специфическая профилактика Инактивированная химическая менингококковая вакцина – содержит капсульные полисахариды В настоящее время выпускаются моно (A), ди (A+C) и поливалентные менингококковые вакцины, обладающие высокой протективной активностью и малой реактогенностью.
Эпидемиология источник инфекции : человек механизм передачи – контактный (половой, реже – бытовой) Клинические проявления Острая гонорея – гнойный уретрит, цервицит; Хроническая гонорея – хронический воспалительный процесс во внутренних половых органах Бленнорея – гнойный конъюнктивит, угрожающий слепотой Иммунитет гуморальный, постинфекционный – практически отсутствует Профилактика неспецифическая – гонобленнореи – 1-2 капли нитрата серебра или другого антисептика сразу после родов в глаза новорожденному (девочкам – еще и в половую щель) острой гонореи – презерватив специфическая – не разработана Этиотропная терапия сульфаниламиды и антибиотики (если выделена культура, то по результатам антибиотикограммы ) гоновакцина
Бактериоскопический метод – Основной Бактериологический метод (Сывороточный агар, асцитический агар с 10% СО2) Серологический метод (РСК, Борде-Жангу )
