И.А.Новикова
При помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток – в крови устанавливают наличие или отсутствие антигенов А, В и делают вывод о групповой принадлежности. Перекрестным способом – одновременно с помощью стандартных сывороток и стандартных эритроцитов. При этом устанавливают наличие агглютиногенов и агглютининов. Использование моноклональных антител – ЦОЛИКЛОНов.
Изогемагглютинирующие сыворотки Исследуемая кровь принадлежит к группе: Анти-(А+В) Анти-В Анти-А - - - 0(I) + - + А(II) + + - В(III) + + + АВ(IV) Контроль с сывороткой группы АВ (IV)- агглютинации не должно быть (+) наличие агглютинации, (-) – отсутствие
Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки Анти-А(АВ) Анти-В Анти-А Добавить эритроциты больного - - - Стандартные эритроциты О(I) А(II) В(III) Добавить сыворотку больного - + + Заключение: Исследуемая кровь группы О (I)
Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки группы Анти-А(А+В) Анти-В Анти-А Добавить эритроциты больного + - + Стандартные эритроциты О(I) А(II) В(III) Добавить сыворотку больного - - + Заключение : Исследуемая кровь группы А (II)
Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки группы Анти-А(А+В) Анти-В Анти-А Добавить эритроциты больного + + + Контроль с сывороткой группы АВ(IV) - Стандартные эритроциты О(I) А(II) В(III) Добавить сыворотку больного - - - Заключение: Исследуемая кровь группы АВ (IV)
Технические: Недоброкачественные сыворотки или эритроциты Перепутывание проб с исследуемой кровью Ошибочное расположение или ошибочный порядок нанесения стандартных сывороток или эритроцитов Нарушение соотношения сыворотка:эритроциты Неоптимальный температурный режим (менее 15 0 С – холодовая агглютинация, боле 25 0 С – замедление агглютинации) Несоблюдение времени реакции ( надо не менее 5 минут) Недобавление физиологического раствора после 3 минуты Неиспользование контрольной реакции с сывороткой группы IV Взаимное перемешивание сывороток пипетками
Биологические вариации: Наличие группы А2 или А2В – дают мелкие, медленно появляющиеся агглютинаты. Реакция может быть ошибочно учтена как отрицательная. Т.е. гр. А2 регистрируется как 1 или 3. Риск ошибки увеличивается при наслоении технических погрешностей. Неспецифическая агглютинация исследуемых эритроцитов. Может наблюдаться при патологических состояниях с диспротеинемией и интоксикацией (опухоли, цирроз, лейкоз, сепсис и др.). Неспецифическую агглютинацию выявляет контроль с сывороткой IV группы. В этих случаях необходимо вновь определить группу крови перекрестным методом. В капли, где наблюдается агглютинация можно добавить подогретый физраствор. При необходимости можно отмыть исследуемые эритроциты теплым физраствором и вновь определить группу крови.
Биологические вариации (продолжение): Ошибки, связанные с наличием экстраагглютининов. В сыворотке крови лиц групп А2 ( II ) и А2В ( IV ) приблизительно в 1% случаев обнаруживаются антитела к А1 антигену – α1. Это осложняет определение группы крови перекрестным методом, так как сыворотка таких лиц агглютинирует стандартные эритроциты А( II ). То есть проявляет себя как сыворотка О ( I ). При иммунодефицитных состояниях у стариков наблюдается снижение уровня групповых агглютининов.
Антигены АВО присутствуют на эритроцитах, клетках почек, слюнных желез и других тканей. Формирование - на 3-ем месяце внутриутробного развития под влиянием 3-х аллельных генов – А,В,О, расположенных на 9 хромосоме. К моменту рождения формирование не закончено. Максимальная антигенность к 3 годам. Группа крови неизменна на протяжении всей жизни.
Наследование антигенов АВО кодоминантное. Возможны 6 генотипов групп крови: ОО, АА. АО, ВВ, ВО, АВ, но 4 фенотипа. У гетерозигот (АО,ВО) гены А и В доминантны, а ген О рецессивен, поэтому гетерозигота АО и гомозигота АА фенотипически проявляется одинаково. Частота встречаемости различных групп: 0(1) - 33,5%, А( II ) – 37,8%, В( III ) – 20,6 %, АВ( IV ) – 8,1%.
Антиген А · В сильной форме - А1 (85% лиц группы А и АВ). · В слабой форме - А2 (14-15%), А3, А4 и т.д. Наличие слабых антигенов А осложняет определение групп крови и является самой частой причиной ошибок. Антиген В Варианты со слабой выраженностью антигена В встречаются очень редко (казуистические случаи).
Химеризм по АВО – присутствие в одном организме эритроцитов, принадлежащих к двум фенотипам. Причины: массивное переливание эритроцитов 1 группы пациенту другой группы трансплантация аллогенного костного мозга на фоне интенсивной иммунодепрессии в естественных у разнояйцевых близнецов.
Группа крови неизменна на протяжении всей жизни, но экспрессия групповых антигенов на эритроцитах может изменяться. Причины: анемия (мегалобластная, сидеробластная) пароксизмальная ночная гемоглобинурия (одновременно с резусантигенами) тяжелые интоксикации
Естественные Иммунные Естественные - два типа – α и β. Класс Ig М. У новорожденных их нет. Появляются к концу 3-6 месяца жизни. Титр у взрослых: α – 1:32, 1:64, β – 1:8 – 1:16. Всегда существует определенное сочетание АГ эритроцитов и естественных антител в сыворотке. Причины изменения титра α-, β-агглютининов: Иммунодефицитные состояния, особенно гуморального типа Заболевания крови (макроглобулинемия Вальденстрема, лимфосаркома, множественная миелома).
Обозначают анти-А и анти-В. Класс G. Причины появления: беременности, несовместимые по АВО (чаще, если мать – 0 (1), а ребенок – А ( II ), В( III ) переливание несовместимой крови введение иммунных препаратов (вакцин, анатоксинов, загрязненных антигенами А и В).
определение групп крови для совместимых гемотрансфузий. При переливаниях несовместимой крови развивается острая посттрансфузионная реакция гемолитического типа (внутрисосудистый гемолиз). при беременностях, несовместимых по АВО развивается гемолитическая болезнь. Бывает редко: приблизительно в 1 случае из 25 несовместимостей.
Это гликолипиды, располагающиеся только в оболочках эритроцитов. Формируются на 6-10 неделе внутриутробного периода. Их сила в это время такая же, как у взрослых. Кодируются 3 генами, каждый из которых может быть в двух вариантах – сильном или слабом. Номенклатура Винера Номенклатура Фишера Rh 0 Hr 0 D d rh ' hr ' C c rh '' hr '' E e
На одной хромосоме возможны 8 разных комбинаций: DCE, dCe и т.д.(восемь групп системы резус). Резус-фактор - D ( Rh 0 ) – самый активный антиген системы резус (в 95% случаев является причиной гемолитической болезни новорожденных). Его называют стандартный резус-антиген. Иммуногенность D - Rh 0 в 20 раз выше, чем у других Rh – АГ. При определении резус-принадлежности у реципиентов принимают во внимание именно этот антиген: D - Rh +, d – Rh -. В Европе 85-86% - Rh +, 14-15% - Rh -.
Предположительно Rh ( D ) действует в эритроцитах как транспортный белок. Индивиды с отсутствием Rh -антигенов страдают гемолитической анемией без наличия аутоантител против эритроцитов. У Rh - индивидов чаще встречается болезнь Ходжкина. У Rh + мальчиков, рожденных Rh - матерями, существует выше риск развития шизофрении.
Резус-отрицательный донор не должен содержать в эритроцитах ни одного из основных ( D, C, E ) антигенов резус ( формула d, c, e ). В противном случае он идет как донор резус-положительный, а как реципиент – резус-отрицательный. При наличии слабых разновидностей антигенов D (например, Du - 1 - 3% резус-положительных людей) как больной (реципиент) регистрируется как резус- отрицательный, а как донор – резус-положительный.
В норме отсутствуют. Появляются у резус-отрицательных лиц в ответ на попадание резус-антигенов: беременность Rh - -женщины Rh + плодом; переливание Rh + крови Rh - реципиенту. Полные (чаще Ig М) – обусловливают посттрансфузионных реакции и в патогенезе гемолитической болезни новорожденных не участвуют, так как не проходят через плаценту. Неполные АТ (чаще G, реже А). IgG проходят через плаценту, обусловливают ГБН. Ig А - в молозиве.
+ Эритроциты Антитела к эритроцитам полные
+ Эритроциты Антитела неполные (сыворотка больного) Агглютинации нет + Антиглобулиновая сыворотка
Формируются на 6-7 неделе внутриутробного периода. Их сила в это время такая же, как у взрослых. Располагаются на эритроидных клетках различной степени зрелости. Антитела – анти KEL аллоиммунного происхождения. Неполные IgG и полные IgM (редко). Клиническое значение (антиген KEL -1): посттрансфузионные осложнения, ГБН. Выявление: конглютинация с 10: желатином, агглютинация в солевой среде, непрямая проба Кумбса.
HLA ( human leucocyte antigens ) - главный комплекс гистосовместимости. Расположены во всех ядросодержащих клетках организма и тромбоцитах. Наибольшее их количество представлено на лимфоцитах. У всех клеток данного индивидуума система HLA тождественна. Это «иммунологический паспорт организма». HLA –гены у человека располагаются в 6 хромосоме. и сконцентрированы в 7 областях (локусах). 3 класса: HLA -1, HLA - II, HLA - III. Наследование кодоминантное. Функция: участие в иммунных реакциях, отторжение тканей при трансплантации.
Обнаружены в полиморфноядерных лейкоцитах периферической крови и клетках костного мозга. Отсутствуют в эритроцитах и тромбоцитах. Антигены гранулоцитов – NA 1, NA 2, NB 1, NC 1, ND 1. Частота встречаемости соответственно 58, 86. 95. 96, 98,5%. Наследование кодоминантное. Гены NA 1 сцеплены с антигенами системы HLA.
