Лептоспироз животных Характеристика возбудителей, диагностика болезни
содержание 1. Краткие сведения о лептоспирозе. 2. Историческая справка о лептоспирозе. 3. Систематика лептоспир. 4. Характеристика возбудителей лептоспироза. 5. Устойчивость лептоспир во внешней среде. 6. Методы лабораторной диагностики лептоспироза. 7. Иммунитет при лептоспирозе. 8. Профилактика и меры борьбы. Заключение 2
3 Литература 1. Коляков Я.Б. Ветеринарная микробиология.- М.: С.-х. литература.- 1952.- 480 с. 2. Конопаткин А.А. и др. Эпизоотология и инфекци-онные болезни с.-х. животных.- М.: Колос, 1984.- 545 с. 3. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. – М.: Медицина.- 1972. – С. 177. 4. Мотавкина Н.С., Артемкин В.Д. Атлас по микробио-логии.- М.: Медицина.- 1976.- 307 с. 5. Поздеев О.К. Медицинская микробиология: Учебник для вузов.- М.: Геотар-Мед.- 2001.- 768 с.
инфекционная, природно-очаговая болезнь животных, птиц и человека, вызываемая различными серотипами спиралевидных бактерий - лептоспир, проявляющаяся лихорадкой, поражением почек, гемоглобину-рией (гематурией), желтушным окрашиванием и некрозами слизистых оболочек и кожи, атонией желудочно-кишечного тракта, абортами, рождением нежизнеспособного потомства, снижением продуктивности животных. 4 Лептоспироз (от греч. l еptos - мелкий, s piros - з авиток )
Газовая гангрена Газовая гангрена 9 Некроз кожи у лошади при хроническом течении лептоспироза 5 П ут и заражения : 1. А лиментарный. 2. Водный. 3. Через поврежденные участки кожи, слизистые рта, носа, глаз, половых путей. 4. Внутриутробный. 5. Половой. Течение болезни : Сверхострое. 3. Подострое. 2. Острое. 4. Хроническое. Формы болезни : 1. Геморрагическая. 6. Токсическая. 2. Желтушная. 7. Нервная. 3. Септическая. 8. Лептоспироносительство. 4. Кишечная. 9. Иммунизирующая субинфекция. 5. Генитальная 10. Абортивная форма.
Лептоспиры в плодных водах абортировавшей коровы
Легкие собаки, павшей от лептоспироза. Многоочаговые геморрагии, проявляющиеся во внутрисосудистых коагуляциях.
Печень собаки, павшей от лептоспироза. Многоочаговый некроз печени, внешне характеризующиеся появлением пятен на органе.
Почка собаки, павшей от лептоспироза. Многоочаговый интерстициальный нефрит и почечный некроз, характеризующиеся появлением пятен на паренхиме почки.
Кровоизлияния в легких морских свинок, инфицированных L. interrogans. A : 24 часа после заражения; B : 48 часов после зараженя; C : 72 часа после заражения; D : 96 часов после заражения.
Лептоспиры в просвете почечных канальцев
8
11
Основные источники и пути передачи лептоспироза
Циркуляция лептоспир в природе
Точечная сыпь при лептоспирозе 6
Лептоспиры в канальцах почек и в ткани печени теленка Срок лептоспироносительства крупный рогатый скот мелкий рогатый скот до 6 месяцев до 9 месяцев свиньи до 2 лет собаки кошки до 3 лет до 119 дней лисицы до 514 дней Грызуны - пожизненные носители лептоспир 7
«Феномен айсберга» при лептоспирозе Больные животные с клиническими симптомами болезни Инфицированные животные – лептоспироносители (отсутствие клинических признаков болезни) 9 10 % 90 %
Феномен айсберга
ПЕРЕЧЕНЬ ОБЪЕКТОВ ПОВЫШЕННОГО РИСКА ИНФИЦИРОВАНИЯ ЛЮДЕЙ И ЖИВОТНЫХ ЛЕПТОСПИРАМИ Животноводческие хозяйства. Зоопарк, цирк, ипподром, выставки животных. Зоомагазины, "птичьи" рынки. Питомники и пункты содержания собак. Мясокомбинаты, молокозаводы, кожевенные заводы. Плодоовощные базы. Предприятия и пункты по сбору и переработке вторсырья. Свалки. Мусоровозы. Лесопарковые хозяйства. Отделы (лаборатории) особо опасных инфекций. Ветеринарные лечебницы. Садовые и огородные участки. 10
Перечень природных очагов лептоспироза на территории г. Москвы 1. Северный административный округ : опытные станции, пасека, лесная дача, дендрарий ТСХА. 2. Северо-Восточный административный округ : Ботанический сад (лесопарк, дендрарий); Свиблово, пойма реки Яузы; территория у Долгих прудов. 3. Северо-Западный административный округ : лесопарк "Покровское-Стрешнево" (Иваньково); лесопарк «Алешкино»; Терехово - совхоз "Тепличный", пойма реки Москвы. 4. Восточный административный округ : Измайловский лесопарк; Терлецкий лесопарк; Косино - лугополевые и влажные участки. 5. Западный административный округ : Солнцево, река Сетунька. 6. Юго-Восточный административный округ : Курьяновская станция аэрации и прилегающая к ней территория; Кузьминский лесопарк. 7. Юго-Западный административный округ : Зюзино, лесопарк; Узкое, лесопарк; Гавриково; Тропарево, лесопарк. 8. Южный административный округ : Зябликово, пойма реки Городни. 9. Зеленоградский административный округ : лес у больницы. 12
Историческая справка 1886 - первое описание клинической картины лептоспироза Вейлем в Германии. 1888 - Васильев Н.П. описал инфекционную желтуху и дифференцировал ее от болезни Боткина (гепатита, вызываемого вирусом), т.к. возбудитель закупоривал желчные протоки. 1914 – японцы Инадо Р. и Идо У. впервые выделили возбудителя лептоспироза. 1928 - Башенин В.А. описал безжелтушную форму лептоспироза (водная лихорадка). 1935 - Никольский С.Н. описал на Северном Кавказе остро протекающее заболевание крупного рогатого скота, названное иктерогемоглобинурией. 1940 - Земсков М.В. и Терских В.И. доказали роль лептоспир в этиологии иктерогемоглобинурии. 1972 - предложено разделить лептоспироз на 2 группы - желтушный и безжелтушный. 1979 - Чернуха Ю.Г. разделил лептоспиры на 19 серогрупп. 13
Отдел - Gracilicutes. Порядок – Spirоc h aetales. Семейство – Leptospiracea e. Род – Leptospira. Виды - - L. interrogans – паразиты, L. biflexa – сапрофиты. Серогруппы - 23 серологические группы. Серовары - 230 серологических варианта, из них 200 - паразиты. Серотипы - каждый вариант представлен типовым штаммом. 14
15
L. interrogans - 202 серовара в 23 серогруппах L.biflexa – 63 серовара в 38 серогруппах Основные возбудители лептоспироза крупный рогатый скот - L. hebdomadis, L. p о m о n а, L. tarassovi, L. grippotyphosa. лошади – L. hebdomadis, L. p о m о n а, L. tarassovi, L. grippotyphosa. свиньи - L. p о m о n а, L. tarassovi. овцы, козы - L. grippotyphosa, L. p о m о n а, L. tarassovi. собаки - L.canicola, L. icterohaemorrhagiae, L. grippotyphosa, L. P о m о n а. грызуны - L. canicola, L. Icterohaemorrhagiae, L. pomona, L. grippotyphosa. 16
Серовары Домашние и синантропные животные Дикие животные Australis крыса, мышь сумчатые Autumnalis корова, мышь, крыса енот, опоссум Ballum мышь, крыса нет данных Bataviae корова, крыса, мышь еж, броненосец, землеройка, крот Bratislava свинья, лошадь, корова, крыса, мышь енот, опоссум, лиса, скунс Canicola корова, овца, лошадь, свинья, крыса енот, еж, броненосец, мангуст, скунс, крот Grippotyphosa корова, свинья, овца, коза, кролик, мышь, крыса крот, енот, скунс, опоссум, лиса, белка, рысь, ласка, еж, мускусная крыса Hardjo корова, свинья, лошадь, овца дикие жвачные Pomona корова, свинья, мышь, лошадь олень, енот, опоссум, еж, лиса, крот Shermani буйвол нет данных Резервуар ряда патогенных для собак лептоспир
Размер : 6-24 мкм в длину и 0,1-0,5 мкм в поперечнике. Форма : спираль с 10-40 завитками. Концы лептоспир крючкообразно изогнуты в виде буквы С или S, с пуговчатыми утолщениями на концах. Аэробы. Микроаэрофилы. Гидрофилы. Спор и капсул не образуют. Подвижны. Имеют 2 периплазматических жгутика (осевые нити), совершают вращательно-поступательные, винтообразные движения. Грамотрицательны, окрашиваются в бледно-розовый цвет (переходный тип бактерий). 17
Импрегнация серебром по Вартин-Старри (коричнево-черный цвет) Анализ тинкториальных свойств не позволяет отнести лептоспиры к грамположительным или грамотрицательным бактериям - их правомерно считать переходным типом бактерий.
Завитки спирали лептоспир плотно примыкают друг к другу, что придаёт им вид «нитки жемчуга» при микроскопии в тёмном поле. 18
1 - наружная мембрана. 2 - периплазматический цилиндр. 3 - периплазматическое пространство. а, б, в - слои наружной мембраны. 4 - жгутики. 5 - цитозоль. 19 Структура лептоспир
Лептоспира в состоянии покоя и при движении. а - осевая эластическая нить, б - перипласт 20
Основные структуры лептоспир – наружная мембрана, осевая нить, цитоплазматическая спираль 21
22 Морфология лептоспир
Деление лептоспир 23
24
25
26
Лептоспира в виде буквы S, видны вторичные завитки 27
КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ Оптимальная температура роста 28-30°С Растут медленно – 7-20 суток, прихотливы На жидких средах слабое помутне-ние, опалесценция Прозрачные колонии в виде диска Требуют жирные кислоты, спирты, витамины В 1 и В 12, 10-15% сыворотки крови кролика или барана. Наличие белка в среде не обязательно. Наличие в среде сахаров угнетает рост лептоспир В полужидких средах помутнение в виде кольца Жидкие среды: Ногуши-Веньона Уленгута Ферворта-Вольфа Тарасова Кортхофа Полужидкая среда: Флетчера Эленгаузена Агаровая среда: ПРЛ 28
В полужидких средах на 1,5- 2 см ниже поверхности появляется помутнение в виде кольца, интенсивность которого усиливается по мере роста ЛС.
В средах с 1% агара ЛС формируют заглубленные колонии, контуры которых могут быть четкими или размытыми. Тенденция к заглубленному росту (феномен Дингера), обеспечивающая некоторое ограничение доступа кислорода, свидетельствует о микроаэрофильности ЛС.
В средах с 2% агара ЛС образуют поверхностные колонии, имеющие разную степень прозрачности вплоть до трудно различимых при обычном освещении.
Биохимические свойства лептоспир Оксидаза - Каталаза + Пероксидаза + Аминопептидазная активность + Протеолитические свойства - Синтез изолейцина + Утилизация азота из мочевины + 29
Антигенная структура лептоспир Соматический О-антиген (видовой) Антиген осевых волокон Группоспецифические антигены Типоспецифические антигены 23 серогруппы 202 серовара Жгутиковый антиген Поверхностный К-антиген (групповой и типовой) 7 видов протеинов, 3 вида липопротеинов, гликопротеин, липополисахарид Пептидогликан, пенициллин-связывающие протеины Протеины классов А и В 30
Факторы патогенности лептоспир Подвижность Адгезивность Ферментативная активность Инвазивность Эндотоксин Липополисахариды 31
Факторы патогенности лептоспир Подвижность проникновение в ткани и органы больного Адгезивность прикрепление к коллагену клеток хозяина Ферментативная активность - фосфолипаза А и С вызывает некрозы, - гемолизины разрушают эритроциты Эндотоксин - липид А нарушает свертываемость крови Инвазивность выживают в макрофагах и разносятся по всему организму Липополисахариды накапливаются в печени, селезенке, лимфатических узлах и вызывают некрозы 32
Устойчивость лептоспир В естественных водоемах 20-30 дней При 15 ° С сохраняться месяцами и может перезимовать в открытых водоемах В кислом молоке 1-2 часа При 76-96 ° С гибнет мгновенно В кислой почве сохраняются 6 недель 33 При воздействии прямых солнечных лучей погибают за 30-120 мин Погибают при дезинфек-ции 0,25% формалином за 5 мин, 0,5% едким натром- за 10 мин, 1% карболовой кислотой за 30 мин. В замороженной сперме 1-3 года
Диагностика лептоспироза Прижизненная сыворотка крови, моча. Для ретроспективной диагностики кровь у подозрительных в заболевании животных отбирают дважды, с интервалом 7-10 дней. Посмертная трупы мелких животных ; от трупов крупных животных - сердце, почка, лимфатические узлы, транссудат грудной и брюшной полостей, мочевой пузырь с содержимым ; абортированный плод целиком или желудок с содержимым и паренхиматозные органы. 34
Методы лабораторной диагностики лептоспироза Основные методы (классические): выделение чистой культуры на жидких и полужидких средах; реакция микроагглютинации (РМА); микроскопия в темном поле; биопроба на молодых лабораторных животных. Современные методы: ♦ серологические - РИФ, РНИФ, МРА, РАЛ, РМА, РАА, РСК, ЭЛИЗА (ИФА), РА; ♦ молекулярные (генотипические) – ПЦР, ДНК-гибридизация, РЭА; ♦ авидин-биотин иммунопероксидаз-ный и иммунофосфатазный тесты (сочетание гистологичес-кого и иммунологического метода); ♦ иммунологическое окрашивание золотом ; ♦ электронная микроскопия. бактериоскопические, бактериологические, серологические и биологические 35
1 – отрицательная 2 – 5 – положитель-ная, с различной степенью агглютинации и лизиса лептоспир Реакция микроагглютинации (РМА) 37 наблюдают скручивание, потерю подвижности, затем лизис 4 5
Реакция иммунофлуоресценции (РИФ) 38
36
Особенности иммунитета при лептоспирозе Виды иммунитета 1. Гуморальный. 2. Напряженный. 3. Колостральный. Специфические антитела выявляются в РМА с 3-4 дня болезни, max титр на 14-25 день. Антитела сохраняются до 1 года. Противолептоспирозные антитела - Ig M и Ig G. Индикаторная функция - Ig M. Защитная функция - Ig G. 39
поливалентная вакцина ВГНКИ против лептоспироза животных 1 и 2 вариантов; концентрированная вакцина против лептоспироза животных 1 и 2 вариантов; лиофилизированная вакцина против лептоспироза животных 1 и 2 вариантов; вакцина против лептоспироза животных и парвовирусной инфекции свиней; вакцина инактивированная концентрированная против парвовирусной болезни свиней, лептоспироза и болезни Ауески (ПЛА); вакцина инактивированная концентрированная против парвовирусной болезни свиней, лептоспироза, болезни Ауески и репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ПЛАР); вакцина инактивированная концентрированная против парвовирусной болезни, лептоспироза, болезни Ауески и хламидиоза свиней (ПЛАХ). вакцина против лептоспироза собак; вакцина против чумы плотоядных, аденовирусных инфекций, парвовирусного и коронавирусного энтеритов и лептоспироза собак (Мультикан-6); вакцина против чумы плотоядных, аденовирусных инфекций, парвовирусного и коронавирусного энтеритов, лептоспироза и бешенства собак (Мультикан-8). Специфическая профилактика 40
41
42
Хозяйство признают неблагополучным по лептоспирозу в случае : обнаружения лептоспир в материале при микроскопии; выделении культур; выявлении возбудителя в гистологических срезах почек или печени; установлении нарастания титра антител при повторном исследовании в 5 раз и более или при обнаружении антител у ранее не реагировавших животных; если специфические антитела обнаружены в сыворотке крови при однократном исследовании по РМА в титре 1:100 и выше более чем у 25 % исследованных животных или по РА (1—4 креста) более чем у 20 % животных. 43
Заключение 44 Лептоспироз – опасное заболевание человека и животных, приводящее к смерти людей в 38% случаев, т.к. медицинские врачи часто путают лептоспироз с гепатитом и назначают лечение как при вирусном заболевании. Однако диагностика лептоспироза у животных ветеринарными врачами затруднений обычно не вызывает. Каждый случай желтухи и «кровавой мочи» у животных нужно рассматривать, как подозрительный на лептоспироз.
