Первый слайд презентации: Способы культивирования вирусов
Наименование вируса Экспериментальная модель Вирус бешенства Вирус Коксаки Вирус полиомиелита Вирус гриппа Вирус клещевого энцефалита Мыши, кролики Мыши-сосунки Обезьяны, крысы Мыши, хорьки Мыши
При вирусологических исследованиях применяют: подкожное, накожное, внутрикожное, внутримышечное, внутрибрюшинное, внутривенное, пероральное, интраназальное, интрацеребральное заражение лабораторных животных.
Слайд 5: Культуры клеток
1. Культуры фиксированных кусочков тканей 2. Однослойные культуры клеток: а) неперевиваемые или первичные культуры клеток (1 генерация); б) перевиваемые (стабильные) культуры клеток (неограниченное число генераций); в) полуперевиваемые или культуры диплоидных клеток (40-50 пассажей). 3. Культуры суспензированных клеток.
Слайд 11: Состав сред для культивирования культур клеток
Вещества Раствор Хенкса Раствор Эрла NaCl 8,0 6,8 KCl 0,4 0,4 CaCl 2 0,14 0,2 MgSO 4 ×7H 2 O 0,1 0,1 MgSO 4 ×6H 2 O 0,1 - NaH 2 PO 4 ×H 2 O - 0,125 NaH 2 PO 4 ×2H 2 O 0,06 - KH 2 PO 4 0,06 - Глюкоза 1,0 1,0 Фенолрот (не всегда) 0,02 0,05 NaHCO 3 0,35 2,2
Слайд 12: Типы сред для культивирования культур клеток
Естественные питательные среды (применяются редко) Естественные питательные среды готовят на основе солевых растворов Хенкса и Эрла, к которым добавляют сыворотку, амниотическую жидкость, эмбриональный экстракт. Например, среда для культивирования клеток HeLa : сыворотка человека – 50%, куриный эмбриональный экстракт – 2%, раствор Хенкса – 48%. Ферментативные гидролизаты белковых веществ. В среды добавляют ферментативные гидролизаты: лактальбумина, казеина, белков крови крупного рогатого скота. Синтетические питательные среды, которые отличаются сложным составом: Среда 199 (Паркера) содержит 20 аминокислот, 17 витаминов, пурины и пиримидины, глюкозу, 9 минеральных солей и ряд других веществ. Эту среду готовят на солевом растворе Хенкса, стерилизуют фильтрованием через бактериальные фильтры. Среда Игла содержит 13 аминокислот, 4 катиона, 3 аниона, 6 витаминов, холин, инозит и углеводы.
Слайд 13: Клетки первичной культуры фибробластов эмбрионов мыши, видны фибриллярные элементы цитоскелета
Слайд 18: Цитопатическое действие вируса на культуру клеток (ЦПД)
возникновение в клетках видимых морфологических дегенеративных изменений (литическая инфекция); - энтеровирусы (вирусы полиомиелита, Коксаки, ЕСНО) вызывают однородную мелкозернистую деструкцию клеток; - аденовирусы превращают клеточный слой в скопления мелких, округлых клеток, расположенных в виде гроздьев винограда; - парагриппозные вирусы, респираторно-синцитиальный, вирусы кори и паротита образуют симпласты.
Слайд 19: ЦПД. Тельца Гварниери (Guarnieri bodies), Poxvirus
Giuseppe Guarnieri (1856–1918), итальянский патолог
Слайд 20: ЦПД. Тельца Бабеша — Негри ( Babeș-Negri bodies ) Rhabdovirus
Многочисленные тельца Бабеша — Негри (в виде гранул черного цвета) в секторе Зоммера гиппокампа (окраска по Манну; Х400). тельца Бабеша – Негри в аммоновом роге собаки, при бешенстве http://mydocx.ru/10-6271.html В.Бабеш ( Victor Babeș ) 1854-1926 румынский бактериолог Adelchi Negri, (1876- 1912), итальянский патолог
Слайд 21: ЦПД. Тельца Каудри ( Cowdry bodies ), Herpes simplex
Edmund Vincent Cowdry (1888-1975)
Слайд 22: ЦПД. Клетки, зараженные Papovavirus SV 40
Менингоэнцефалит (вирус SV40 ). Мозг, белое вещество. Окраска гематоксилином и эозином, х 600. Астроциты с обильным эозинофильной цитоплазмой и эксцентричными ядрами. http://www.askjpc.org/wsco/wsc_showconference.php?id=421
Слайд 24: Способы заражения куриного эмбриона
Заражение куриных эмбрионов происходит на 5-19 день развития. В результате происходит быстрое накопление вирусов в области заражения. Индикацию вирусов проводят с помощью серологических реакций.