Основные биотопы полости рта и методы их исследования
Полость рта можно разделить на несколько отличных друг от друга по условиям обитания, биотопов : слизистая оболочка полости рта, протоки слюнных желез с находящейся в них слюной, десневая жидкость и зона десневого желобка, ротовая жидкость (слюна), зубной налет.
различия в составе микробиоценоза каждого из перечисленных биотопов обеспечивают физико-химические особенности биотопа: рН среды, вязкость, температура, -наличие органических соединений и остатков пищи, парциальное давление газов
наиболее обширный по площади и разнообразный по условиям обитания биотоп. Биопленка слизистой строго структурирована, поэтому микрофлора слизистой существенно варьирует в разных участках.
На поверхности слизистой оболочки вегетирует преимущественно грамотрицательная анаэробная и факультативно-анаэробная флора, а также микроаэрофильные стрептококки : S. mitis. На спинке языка = S. salivarius.
В подъязычной области, на внутренней поверхности щек, в складках и криптах слизистой оболочки полости рта обычно преобладают облигатно-анаэробные виды : - вейллонеллы, -пептострептококки, - лактобактерии, - стрептококки = S. mitis
На слизистой твердого и мягкого нёба, нёбных дужках, миндалинах в большом количестве встречаются: разнообразные стрептококки, коринебактерии, нейссерии, гемофиллы и псевдомонады, дрожжеподобные грибы, нокардии.
1. микроскопический = с помощью отпечатков на стекле, 2. бактериологический - метод отпечатков на агаровые блоки, с последующим подсчетом числа колоний, выросших на 1 см 2 пластины. В норме этот показатель составляет от 200 до 20 000.
Один из наименее изученных биотопов полости рта. Существует 2 мнения : 1. из-за высокой бактерицидной активности ферментов, лизоцима, секреторных иммуноглобулинов и других факторов специфической и неспецифической защиты слюна в протоках желез здорового человека должна быть практически стерильной. 2. возможно наличие незначительного количества бактерий, преимущественно относящихся к облигатно-анаэробным видам (вейлонеллы, пептосстрептококки ).
Окончательному ответу на этот вопрос препятствуют трудности стерильного забора материала, что исключает контаминацию образцов микрофлорой слизистой и ротовой жидкости. Для стерильного исследования слюны в настоящее время используются различные канюли, фиксируемые в области выводного протока слюнной железы (однако, надежность этого метода ограничена). Далее выполняют посев на питательные среды для анаэробного культивирования.
Десневая жидкость = транссудат, который секретируется в области десневого желобка и практически сразу контаминируется микрофлорой слизистой десны и ротовой жидкости.
В данном биотопе преобладают: фузобактерии, лептотрихии, актиномицеты, спириллы, анаэробные вибрионы, кампилобактеры, спирохеты.
Это основное место обитания представителей родов: B acteroides, Porphyromonas, Prevotella. Также встречаются : простейшие, дрожжеподобные грибы, микоплазмы.
Концентрация перечисленных микроорганизмов в десневой жидкости резко увеличивается при формировании патологического десневого кармана при пародонтите = пародонтального кармана.
Задержка пищи, детрита в кармане, нарушение циркуляции жидкости ведут к резкому падению редокс-потенциала → создаются оптимальные условия для размножения: облигатно-анаэробной флоры : Н - р, Porphyromonas gingivalis, Prevotella melaninogenica, представителей группы бактероидов: превотеллы, порфиромонады, бактероиды, токсическим факторам которых отводят решающую роль в прогрессировании воспалительного процесса в пародонте.
обычно используют метод количественного забора слюны микропипетками, канюлями, капиллярами и посев на питательные среды. Концентрация бактерий у здорового человека в десневой жидкости составляет не более 100 тыс. КОЕ/ мл, а при развитии гингивита или пародонтита - десятки и сотни миллионов.
= важнейший биотоп полости рта, так как: - через нее осуществляется взаимодействие между другими частями микробиоценоза полости рта - реализуются различные регуляторные воздействия со стороны макроорганизма.
Основа ротовой жидкости = слюна, секретируемая из протоков слюнных желез, которая заселяется разнообразной микрофлорой: сюда постоянно поступают микробы, размножающиеся на слизистой полости рта, в десневом желобке, карманах, складках и в зубной бляшке: - они длительно сохраняют жизнеспособность, - многие виды (в частности, не имеющие факторов адгезии к слизистой или эмали) активно размножаются ( вибрионы, селеномонады, спирохеты и спириллы).
В ротовой жидкости в значительном количестве содержатся: - вейллонеллы, - микроаэрофильные стрептококки S. salivarius, - факультативно-анаэробные стрептококки, - аэрококки (стафилококки, нейссерии и др. аэробные кокки), - микоплазмы.
количественное культуральное исследование = посев на питательные среды. Концентрация бактерий в зависимости от методики забора и культивирования составляет в норме от нескольких десятков млн до миллиардов клеток в мл = 10 млн-1 мрд – 10 7 -10 9
(ЗУБНАЯ БЛЯШКА = старое название, ЗУБНОЙ НАЛЕТ = новое ) наиболее сложный и многокомпонентный биотоп, формирующийся на поверхности зуба. в составе зубной бляшки определяются практически все представители микробной флоры полости рта. но их количество существенно варьирует у разных людей и в разные периоды их жизни.
Своеобразие этого биотопа заключается в том, что: он в значительной степени является результатом жизнедеятельности различных микроорганизмов орального биоценоза. в его формировании определяющая роль принадлежит макроорганизму и экологическим факторам, оказывающим на него влияние в течение жизни (диета, образ жизни, профессиональные вредности и пр.).
Согласно современным представлениям, зубная бляшка = налет = типичный вариант биоплёнки - симбионтного сообщества микробных видов, формирующегося в условиях текучих жидких сред. нарушения количественного и качественного состава симбионтов данного биотопа, нарушения их взаимодействия с макроорганизмом ведут к возникновению кариеса зубов и пародонтита.
1. культуральный метод (устарел, используется редко): - материал берут зондом или металлическим шпателем, - взвешивают на аналитических весах, - проводят механическое растирание бляшки или ее дезинтеграцию ультразвуком, - засевают на питательные среды по методу Голда на 2 чашки, - одну культивируют в аэробных условиях, 2-ю - в анаэробных культивирования. Количество бактерий выражают в колониеобразующих единицах (КОЕ) в г материала.
2. Микроскопия с использованием однофокусного сканирующего лазера в естественных условиях – исследует биопленки в их естественном состоянии.
Биологические пленки = организованные сообщества микробов, формирующиеся в условиях текучих сред. Они образуются во всех естественных жидких средах, где есть направленное движение жидкости. Микроорганизмы в биопленке ведут себя не так, как бактерии в культуральной среде.
Биопленка - взаимодействующая общность разных типов микроорганизмов; Микроорганизмы в биопленке собраны в микроколонии; Микроколонии окружены защитным экзополисахаридно-муциновым матриксом, образованным из микробных полимеров; Внутри микроколоний формируется микроэкологическая среда; Микроорганизмы имеют примитивную систему связи; Микроорганизмы в биопленке устойчивы к антибиотикам, антимикробным средствам и защитным реакциям организма хозяина.
Под микроскопом: бактерии в биопленке распределены неравномерно, они сгруппированы в микроколонии, микроколонии окруженны обволакивающим межмикробным матриксом, матрикс содержит внутреннюю среду, в состав которой входят микроэлементы и сигнальные вещества, продуцируемыми микроорганизмами одного вида для других симбионтов матрикс пронизан каналами, по которым циркулируют питательные вещества, продукты жизнедеятельности, ферменты, метаболиты и кислород. -
Под микроскопом: микроколонии имеют свои микросреды, (кот. отличаются уровнями рН, усваиваемостью питательных веществ, концентрациями кислорода). бактерии в биопленке общаются между собой посредством химических раздражений (сигналов). Эти химические раздражители вызывают выработку бактериями потенциально вредных белков и ферментов.
Под микроскопом: в биопленке, бактерия вырабатывает такие вещества, которые она не продуцирует, будучи в культуре, а матрикс, окружающий микроколонии, служит защитным барьером: ---обеспечивает устойчивость биопленки к воздействиям извне, ---выполняет адгезивную, транспортную и дренажную функцию для населяющих его микробов.
С помощью сканирующей электронной и иммунолюминесцентной микроскопии показано, что зубная бляшка состоит в основном из микробов с незначительным включением бесструктурного вещества органической природы.
В норме зубной налет состоит из: 80% воды и белка, 20% гликопротеидов, 1-2% декстрина, - ионы кальция, фосфора, калия, натрия, фтора, ферменты бактериального происхождения: фосфатазы, протеазы, коллагеназы, гиалуронидазы.
1. адгезия к эмали эпителиальных клето к, инвазированных бактериями, с последующим ростом микроколоний, 2. преципитация внеклеточных гликанов, продуцируемых S. mutans и S. sanguis, 3. осаждение гликопротеинов слюны →формирование пелликулы → адгезия к ней бактерий, 4. агглютинация бактерий антителами с последующей фиксацией на поверхности эмали.
С помощью иммунолюминесцентной микроскопии показано, что бактерии в зубной бляшке покрыты иммуноглобулинами классов А и G.
Зубная бляшка начинает образовываться уже в первые минуты после чистки зубов, причем в динамике ее формирования происходят значительные изменения характера микробиоценоза. Общая тенденция = изменение состава флоры от доминирования аэробных и факультативно-анаэробных форм ( преимущественно грампозитивных кокков), к облигатно-анаэробным грамнегативным палочкам и извитым формам.
3 фазы: 1 фаза – ранняя зубная бляшка 2 фаза - динамичная бляшка (равновесная) 3 фаза - зрелая зубная бляшка
3 фазы: 1 фаза – ранняя зубная бляшка - первые 1-4 часа после тщательной чистки зубов (или обработки ультразвуком на аппарате "Пьезон-мастер"). Микроорганизмы: - кокки (стрептококки, нейссерии, вейллонеллы), - палочки (дифтероиды). ОБЩЕЕ КОЛ-ВО – 100-5 ТЫС.
2 фаза - динамичная бляшка - до 4 - 5 дней – РАВНОВЕСНАЯ (т.к. соотношение микробов поддерживается даже при отсутствии систематической чистки зубов). Характеризуется: - уменьшением доли грампозитивных кокков, - нарастанием доли: грамвариабельных нитевидных форм (лептотрихий), грамнегативных вейллонелл и фузобактерий. ОБЩЕЕ КОЛ-ВО – 1-10 МЛН
2 фаза - динамичная бляшка У лиц с хорошими адаптационными способностями, с так называемой, "высокой естественной санацией" микробиоценоз зубной бляшки может поддерживаться в этом состоянии на протяжении значительных отрезков жизни.
3 фаза - зрелая зубная бляшка - от 6 - 7 дней и далее Зубная бляшка принимает окончательный по составу симбионтов вид, хотя количественные сдвиги в ней происходят постоянно: --- В ней резко снижается количество: - аэробных видов - нейссерии, ротий, - факультативно-анаэробных стрептококков. --- Преобладают нитевидные бактерии и палочки, формирующие цепочки. ОБЩЕЕ КОЛ-ВО = 10 МРД – 100 МРД
может быть: ЗРЕЛАЯ СТАБИЛЬНАЯ = может длительное время оставаться равновесной. ЗРЕЛАЯ НЕСТАБИЛЬНАЯ = прогрессирующая
образуется при неправильной и нерегулярной чистке зубов в составе бляшки преобладают отрицательные тенденции с точки зрения гигиенического состояния полости рта:
1. Резко увеличивается количество: грамнегативных облигатно-анаэробных бактерий: бактероиды, фузобактерии, извитые формы, грампозитивных : актиномицеты, микроаэрофильные стрептококки, стрептококки, энтерококков.
2. В избытке могут появляться: клостридии, вирулентные бактероиды, превотеллы, порфиромонады, нокардии.
может индуцировать развитие гингивита и пародонтита у лиц, которые нерегулярно или неправильно чистят зубы.
Профилактические мероприятия, включающие: - чистку зубов, - полоскание ротовой полости, - использование зубных щёток, зубных нитей, направлены на устранение избытка зрелого зубного налёта и поддержания равновесной зубной бляшки на 3-й фазе. При минерализации зубного налета образуется ЗУБНОЙ КАМЕНЬ.
