ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАСЕДАНИЕ СНК
МЕТОДЫ: Определение количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в молоке Определение бактерий группы кишечных палочек в молоке
Молоко пастер. « Авида » 2,5% Молоко пастер. «Время му » 2,5% Молоко домашнее сырое/кипяченое Виды молока для исследования:
Молоко пастер. « Авида » 2,5% №1 Молоко пастер. «Время му » 2,5% №2 Молоко домашнее сырое №3 /кипяченое №4 Виды молока для исследования: №4 №1 АВИДА №2 ВРЕМЯ МУ №3 СЫРОЕ КИПЯЧЕНОЕ
Сущность метода: ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА МЕЗОФИЛЬНЫХ АЭРОБНЫХ И ФАКУЛЬТАТИВНО-АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ Метод основан на способности мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов размножаться на плотном питательном агаре при температуре при 30±1 в течение 72 часов. Количество засеваемого продукта устанавливают с учетом наиболее вероятного микробного обсеменения.
СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ 1. Приготовление разведений молока от до см 3. 1:10000 1:100000 1:1000000 2. По 1 см 3 каждого разведения засеять в две чашки Петри с заранее маркированной крышкой. Чашки Петри x 2
3. Залить 10-15 см 3 расплавленного и остуженного до 40-45 мясопептонного агара. Чашки Петри x 2 с разведениями молока МПА Чашки Петри x 2 с разведениями молока и МПА 4. После заливки агара тщательно перемешать путем легкого покачивания для равномерного распределения посевного материала. 5. После застывания агара чашки Петри перевернуть крышками вниз и поставить в термостат с температурой 30±1℃ на 72 часа.
6. Спустя 72 часа в термостате подсчитать количество выросших колоний на каждой чашке, поместив ее вверх дном на темном фоне, пользуясь лупой с увеличением в 4-10 раз. 7. При большом числе колоний и равномерном их распределении в питательном агаре дно чашки Петри разделить на 4 и более одинаковых секторов и выполнить подсчет число колоний в 2-3 секторах, но не менее чем на 1/3 поверхности чашки.
8. Найти среднее арифметическое число колоний и умножить на общее количество секторов всей чашки. I II IV III X = n 10 m Количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в 1 см3 молока (Х) вычисляют по формуле: где n – количество колоний, подсчитанных на чашке Петри; m – число десятикратных разведений. За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое, полученное по всем чашкам Петри.
Сущность метода: 1. Определение бродильного титра. Метод основан на способности БГКП сбраживать в питательной среде лактозу с образованием кислоты и газа при температуре 37±1 в течение 24 часов. 2. Пересев БГКП на среду Эндо. Метод предназначен для подтверждения принадлежности бактерий, вызвавших брожение в среде Кесслера, путем пересевания на среду Эндо с образованием блестящих красных бляшек или розовых колоний с металлическим блеском или без него при температуре 37±1 в течение 24 часов. ОПРЕДЕЛЕНИЕ БАКТЕРИЙ ГРУППЫ КИШЕЧНЫХ ПАЛОЧЕК
СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ 1. Приготовление разведений молока от до см 3. СРЕДА КЕССЛЕРА В составе в качестве: Углевода – лактоза; В- ва, ингибирующего рост других групп бактерий – бычья желчь; Индикатора – генцианвиолет. Пробирок со средой Кесслера x 5
2. В 5 пробирок со средой Кесслера внести по 1 см 3 соответствующего разведения молока. Пробирок со средой Кесслера x 5 Молоко с разведением: 1:10; 1:100; 1:1000; 1:10000; 1:100000 3. Поставить все пробирки в термостат при температуре 37±1℃ на 18-24 часа.
4. По окончании инкубации пробирки просмотреть. При отсутствии газообразования в поплавке в пробирке с наименьшим из засеваемых объемов дают заключение об отсутствии в продукте БГКП. При наличии газообразования в поплавке в пробирке с наименьшим из засеваемых объемов считается, что БГКП обнаружены в этом количестве. ПЕРЕСЕВ НА СРЕДУ ЭНДО!
4. По окончании инкубации пробирки просмотреть. При наличии газообразования в поплавке в пробирке с наименьшим из засеваемых объемов считается, что БГКП обнаружены в этом количестве. ПЕРЕСЕВ НА СРЕДУ ЭНДО! + + _ _ Исходная среда без признаков роста
5. Для подтверждения принадлежности бактерий, вызвавших брожение в среде Кесслера, материал из забродивших пробирок пересеять на среду Эндо. Дно чашки Петри с застывшей средой Эндо разделить карандашом по стеклу на 4 или 8 секторов. I II IV III 6. Из пробирки со средой Кесслера взять петлей немного жидкости и провести ею расширяющимся зигзаком «Штрих» по поверхности агара, начиная от центра сектора к краю чашки. Для получения изолированных колоний петлю не отрывать от поверхности агара!
7. Чашки Петри перевернуть вверх дном и поставить в термостат при температуре 37±1℃ на 24 часа. 8. После инкубации определить характер выросших колоний. 9. На среде Эндо образовались блестящие красные/розовые колонии с металлическим блеском/без него.
10. Не менее чем из 5 колоний приготовить мазки и окрасить их по Граму. Бактерии группы кишечных палочек – грамотрицательные, неспорообразующие
БЛАГОДАРИМ ЗА УЧАСТИЕ! СНК
