Реакция преципитации сходна по механизму с реакцией агглютинации. Они различаются тем, что в реакции агглютинации участвует цельный антиген, а в реакции преципитации – антиген в растворенном состоянии.
В зависимости от задач и условий известно несколько методов постановки реакции преципитации : Преципитация в геле ( агаре ) Кольцепреципитации (по Асколи ) Иммунодиффузии Иммунофореза Иммуноэлектрофореза
Реакцию проводят в узких преципитационных пробирках - на иммунную сыворотку наслаивают растворимый антиген. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата.
Исследуемый антиген (фильтрат бульонной культуры, экстракт микробных тел, экстракты пораженных органов, СМЖ, гной, мокрота, моча и др.) Преципитирующая сыворотка, полученная от животных, иммунизированных специальным преципитиногеном Физиологический раствор (Участвующие в реакции ингредиенты должны быть совершенно прозрачны. Для этого их центрифугируют или фильтруют) Преципитационные пробирки высотой 4-6 см и диаметром 0,4-0,5 см – реакция в них наступает значительно быстрее и проявляется более четко Микропипетки или пастеровские пипетки (для каждого ингредиента отдельная) Штативы, резиновые груши, химические пробирки Термостат, центрифуга
При положительной реакции преципитации в течение 5-10 минут на границе соприкосновения двух жидкостей появляется хорошо видимое на темном фоне кольцо молочно-белого цвета, четко отграниченное сверху и снизу. В контрольных пробирках, за исключением пробирки №2 (специфическая Преципитирующая сыворотка и и заведомо соответствующий ей антиген) кольца помутнения не появится. Контроли сыворотки Контроль АГ Опыт
В основу метода положен принцип взаимодействия антигена со специфической сывороткой, диффундирующих в толщу агара и образующих в нем зону преципитации. Применяется для определения токсигенности дифтерийной палочки.
Исследуемый антиген Музейная культура токсигенных дифтерийных бактерий Фильтровальная бумага, пропитанная специфической антитоксической противодифтерийной сывороткой Стерильные чашки Петри с агаром ОТДМ (определение токсигенности дифтерийных микроорганизмов) Бактериологические петли, спиртовка Термостат
На застывшую среду кладут стерильную полоску фильтровальной бумаги, пропитанную раствором антитоксической сыворотки (1,5 х 6 см) На расстоянии 0,8 см от края фильтровальной бумаги и друг от друга, наносят бляшки культуры музейного и исследуемого штамма диаметром 0,5 см Помещают чашку с посевом в термостат на 24 часа
При положительном результате у токсигенных культур между бляшками посевов и фильтровальной бумагой появляются тонкие штрихи образовавшегося преципитата. Стрелки преципитата двух рядом расположенных токсигенных штаммов сходятся между собой. Стрелки нетоксигенных штаммов не сходятся, а перекрещиваются
Реакция радиальной иммунодиффузии Иммунную сыворотку с расплавленным агаровым гелем равномерно наливают на стекло. После застывания в геле делают лунки, в которые помещают антиген в различных разведениях. Антиген, диффундируя в гель, образует с антителами кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют для определения в сыворотке крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента и др.
Иммуноэлектрофорез Сочетание метода электрофореза и им-мунопреципитации : - смесь антигенов вносится в лунки геля и разделяется в геле с помощью электрофореза, затем в канавку параллельно зонам электрофореза вносят иммунную сыворотку, антитела которой диффундируют в гель и образуют в месте "встречи" с антигеном линии преципитации.
Сибирской язвы, туляремии, оспы и т.д. При типизации и изучении антигенной структуры некоторых микроорганизмов В судебной медицине для определения принад-лежности крови, спермы В санитарной экспертизе продуктов.
