(окончательный ответ исследований)
Для микроскопических исследований (изучение бактерий под микроскопом) используют несколько типов микроскопов: 1. биологический, 2. люминисцентный, 3. электронный. С помощью этих исследований определяют: подвижность (метод «висячей капли»), морфологию, наличие капсул и спор ( приготовление фиксированных мазков с последующей окраской: по Граму, Цилю-Нильсену, Бурри-Гинсу и др.) 1 2 3
Световая микроскопия предназначена для изучения окрашенных препаратов на предметных стеклах. С помощью световой микроскопии можно исследовать подвижность микроорганизмов. Для этого применяют метод висячей капли. Небольшую каплю микробной взвеси наносят на середину покровного стекла. Предметное стекло с углублением ("лункой"), края которого смазаны вазелином, осторожно накладывают на покровное стекло так, чтобы капля исследуемой жидкости оказалась в центре углубления, плотно прижимают к стеклу и быстро переворачивают кверху.
Фазово-контрастная микроскопия основана на интерференции света: прозрачные объекты, отличающиеся по показателю преломления от окружающей среды, выглядят либо как темные на светлом фоне (позитивный контраст), либо как светлые на темном фоне (негативный контраст). Фазово-контрастная микроскопия применяется для изучения живых микроорганизмов и клеток в культуре ткани.
Темнопольная микроскопия основана на рассеянии света микроскопическими объектами Объекты при темнопольной микроскопии выглядят ярко светящимися на темном фоне. Применяется темнопольная микроскопия преимущественно для изучения спирохет и обнаружения (но не изучения морфологии) крупных вирусов.
В основе люминесцентной микроскопии лежит явление люминесценции, т. е. способности некоторых веществ светиться при облучении их коротковолновой (сине-фиолетовой) частью видимого света либо ультрафиолетовыми лучами с длиной волны, близкой к видимому свету. Люминесцентная микроскопия используется в диагностических целях для наблюдения живых или фиксированных микроорганизмов, окрашенных люминесцирующими красителями ( флюорохромами ) в очень больших разведениях, а также при выявлении различных антигенов и антител с помощью иммунофлюоресцентного метода
Поляризационная микроскопия основана на явлении поляризации света и предназначена для выявления объектов, вращающих плоскость поляризации. Применяется в основном для изучения митоза.
В основе ультрафиолетовой микроскопии лежит способность некоторых веществ (ДНК, РНК) поглощать ультрафиолетовые лучи. Она дает возможность наблюдать и количественно устанавливать распределение этих веществ в клетке без специальных методов окраски. В ультрафиолетовых микроскопах используется кварцевая оптика, пропускающая ультрафиолетовые лучи
Электронная микроскопия принципиально отличается от световой как устройством электронного микроскопа, так и его возможностями. Изображение в электронном микроскопе наблюдают на флюоресцирующем экране и фотографируют. Высокая разрешающая способность современных электронных микроскопов позволяет получить полезное увеличение в миллионы раз. С помощью электронного микроскопа изучают ультратонкое строение микроорганизмов и тканей, а также проводят иммунную электронную микроскопию.
Простой метод. Фиксированный мазок окрасить каким-либо одним красителем, например фуксином водным (1-2 мин) или метиленовым синим (3-5 мин), промыть водой, высушить и микроскопировать. Сложные методы. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоты и др. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других. Окрас методом Грама является сложным методом.
На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-2 мин ее снять, а краситель слить. Нанести раствор Люголя на 1-2 мин. Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя. Промыть водой. Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 мин, промыть водой, высушить и микроскопировать. Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный
1. Туберкулезные микобактерии в молоке. 2. Пастереллы в крови птиц. 3. Капсулы сибиреязвенных бацилл. 4. Споры сибиреязвенных бацилл. 5. Споры столбнячных бацилл в культуре. 6. зерна волютина в дифтерийных коринебактериях.
7. Бактерии рожи свиней в печени. 8. Клостридии эмкара в мазке из некротизированной мышцы. 9. Бруцеллы в смешанной культуре. 10. Стрептококки в молоке. 11. Кишечная палочка в мазке из агаровой культуры. 12. Азотбактерии.
